對(duì)簡(jiǎn)單，可用于那些對(duì)厭氧要求相對(duì)較低的一般厭氧菌的培養(yǎng)，如堿性焦性沒食子酸法、厭氧罐培養(yǎng)法、庖肉培養(yǎng)基法等。本實(shí)驗(yàn)將主要介紹這三種，它們都屬于**基本也是**常用的厭氧微生物培養(yǎng)技術(shù)。其中有些厭氧微生物要求高的培養(yǎng)研究，對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器也有較高的要求，如主要用于嚴(yán)格厭氧菌分離和培養(yǎng)的亨蓋特技術(shù)、
厭氧培養(yǎng)箱(手套箱)法等。
厭氧培養(yǎng)箱已逐漸普及，本實(shí)驗(yàn)也作簡(jiǎn)要介紹。
1．堿性焦性沒食子酸法
焦性沒食子酸與堿溶液(NaOH、Na2CO3或NaHCO3)作用后形成易被氧化的堿性沒食子鹽，能通過氧化作用而形成黑、褐色的焦性沒食子橙從而除掉密封容器中的氧。這種方法的優(yōu)點(diǎn)是無需特殊及昂貴的設(shè)備，操作簡(jiǎn)單，適用于任何可密封的容器，可迅速建立厭氧環(huán)境，適用于前期實(shí)驗(yàn)性探索研究；而其缺點(diǎn)是在氧化過程中會(huì)產(chǎn)生少量的一氧化碳，對(duì)某些厭氧菌的生長有抑制作用，同時(shí)，NaOH的存在會(huì)吸收掉密閉容器中的二氧化碳，對(duì)某些厭氧菌的生長不利。用NaHCO3。代替NaOH，可部分克服二氧化碳被吸收問題，但卻又會(huì)導(dǎo)致吸氧速率的降低。當(dāng)然，大批量厭氧培養(yǎng)需消耗大量實(shí)驗(yàn)藥品，并產(chǎn)生大量廢液，可能引起環(huán)境污染。
2．厭氧罐培養(yǎng)法
利用一定方法在密閉的厭氧罐中生成一定量的氫氣，而經(jīng)過處理的鈀或鉑可作為催化劑催化氫與氧化合形成水，從而除掉罐中的氧而造成厭氧環(huán)境。由于適量的CO2(2％～10％)對(duì)大多數(shù)的厭氧菌的生長有促進(jìn)作用，在進(jìn)行厭氧菌的分離時(shí)可提高檢Ⅲ率，所以一般在供氫的同時(shí)還向罐內(nèi)供給一定的CO2。厭氧罐中H2及CO2的生成可采用鋼瓶灌注的外源法，但更方便的是利用各種化學(xué)反應(yīng)在罐中自行生成的內(nèi)源法，例如，鎂與氯化鋅遇水后發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生氫氣，碳酸氫鈉加檸檬酸水后產(chǎn)生CO2：
Mg+ZnCl2+2H2O→MgCl2+Zn(OH)2+H2↑ C6H8O7+3NaHCO3→Na3(C6H5O7)+3H2O+3CO2↑
厭氧罐中使用的厭氧度指示劑一般都是根據(jù)亞甲藍(lán)(methylene blue)在氧化態(tài)時(shí)呈藍(lán)色而在還原態(tài)時(shí)呈無色的原理設(shè)計(jì)的。目前，厭氧罐技術(shù)早已商業(yè)化，有多種品牌的厭氧罐產(chǎn)品(厭氧罐罐體，催化劑、氣體發(fā)生袋、厭氧指示劑)可供選擇。它實(shí)際上已經(jīng)同
厭氧培養(yǎng)箱類似，但因?yàn)轶w積小、攜帶方便，使用起來十分方便。圖3—13顯示了一般常用的厭氧罐的基本結(jié)構(gòu)。
3．庖肉培養(yǎng)基法
堿性焦性沒食子酸法和厭氧罐培養(yǎng)法都主要用于厭氧菌的斜面及平板等固體培養(yǎng)，而庖肉培養(yǎng)基法則在對(duì)厭氧菌進(jìn)行液體培養(yǎng)時(shí)**常采用。該方法基本原理是，將精瘦牛肉或豬肉經(jīng)剁切、煮干、密閉保存處理后配成庖肉培養(yǎng)基，其中既含有易被氧化的不飽和脂肪酸能吸收氧，又含有谷胱甘肽(GSH)等還原性物質(zhì)可形成負(fù)氧化還原電勢(shì)差，再加上將培養(yǎng)基煮沸驅(qū)氧及用石蠟凡士林封閉液面，可用于培養(yǎng)厭氧菌。這種方法是保藏厭氧菌，特別是厭氧的芽孢菌的一種簡(jiǎn)單可行的方法。若操作適宜，比如額外添加100μg／ml。的新霉素，嚴(yán)格厭氧菌都可獲得生長。
4．厭氧培養(yǎng)箱(手套箱)法
同以上三種方法相比，厭氧培養(yǎng)箱(圖3一14)的厭氧環(huán)境**高，非常適用于培養(yǎng)**厭氧微生物。該方法的優(yōu)點(diǎn)是提供一個(gè)大的厭氧培養(yǎng)空間，保證高度無氧環(huán)境，由于系統(tǒng)的高度集成，無需上述方法的復(fù)雜操作過程，無大量化學(xué)廢物產(chǎn)生。該方法的工作原理是注入氫氣H2透過鈀[鈀催化劑片或鈀桶(帶熱量)]催化氫氧化合作用把腔內(nèi)的氧氣化成水，除去氧O2
因此氧濃度很低。產(chǎn)生的水蒸氣通過系統(tǒng)的干燥管進(jìn)行干燥。從而達(dá)到手套箱內(nèi)干燥的效果，也同時(shí)減少系統(tǒng)操作臺(tái)內(nèi)的氧氣的含量。上述化學(xué)反應(yīng)中的熱量和催化劑鈀是系統(tǒng)構(gòu)造中的加熱器來完成的，如圖3一14所示。
氣閥的作用是在使用前，充進(jìn)惰性氣體的人口，常充進(jìn)的惰性氣體有氮?dú)?85％)、氫氣(10％)和二氧化碳(5％)，通過真空泵的往復(fù)抽吸置換，達(dá)到了痕量氧的環(huán)境。
注意：混合氣體的成分根據(jù)需要而定。其中二氧化碳的主要功能是提供厭氧培養(yǎng)需要的氣源，氫氣用于除氧，氨氣用于保持厭氧培養(yǎng)箱的無氧氛圍。
